INTRODUÇÃO
Sabe-se que a tecnologia do DNA recombinante pode produzir mudanças genéticas em microrganismos com o objetivo de melhorar características bioquímicas e fisiológicas que tenham valor para a indústria e possam ser exploradas comercialmente, como no caso da produção de enzimas. Ainda, as propriedades das enzimas podem ser melhoradas por desenho racionalizado ou evolução direcionada e a associação das duas estratégias apresentará uma rota de maior sucesso para melhorar as propriedades e função de uma enzima, ou mesmo criar uma nova função enzimática.
Dessa maneira, foi desenvolvida a presente invenção, com a intenção de alcançar um método de obtenção do vetor de expressão pT7BsXA através das etapas (a) inclusão dos sítios de restrição específicos; (b) construção, por evolução dirigida, da biblioteca de variantes com mutações aleatórias na região do promotor por error-prone PCR; (c) construção, por evolução dirigida, da biblioteca de variantes com mutações aleatórias na região de origem de replicação ColE1 (ori) por error-prone PCR e (d) inserção do gene da proteína de interesse, em particular, enzimas oxidorredutases, transferases, hidrolases, liases, isomerases e/ou ligases. Adicionalmente, o presente pedido refere-se a um cassete de expressão.
APLICAÇÕES E PÚBLICO ALVO
Pode ser aplicado no campo da medicina, genética, e da biotecnologia. O público alvo são empresas que atuam com modificações genéticas.
Figura: Eletroforese em gel de agarose com bandas que caracterizam digestões do vetor pT7BsXA, após processo de mutagênese sítio-dirigido por PCR, para introduzir sítios de restrição Apal e Xhol no vetor pT7BsXA.
ESTÁGIO DE DESENVOLVIMENTO
Área: Outros 0083/2014 FFCLRP Polo Ribeirão Preto
Pedido de Patente protegido sob o nº: BR102014017026-0 foprado@usp.br
www.patentes.usp.br
Apoio e fomento: FAPESP e CNPq
Processo nº2007/51561-1, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP). “As opiniões, hipóteses e conclusões ou recomendações expressas neste material são de responsabilidade do(s) autor(es) e não necessariamente refletem a visão da FAPESP”